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  • 离心法测定乳脂肪实验报告

    分类:实验报告 时间:2017-01-02 本文已影响

    篇一:原料乳实验报告

    原料乳的质量测定

    离心法测定乳脂肪实验报告

    一、实验目的

    1.1 了解生乳的国家标准及相关质量指标要求 1.2 掌握相关质量指标的检测方法及原理 二、实验内容

    2.1 乳总固形物的测定 2.2 新鲜度的测定

    2.3 原料乳抗生素残留的测定 2.4 原料乳菌落总数的测定 三、实验原理

    3.1 乳固形物测定原理

    先分别测定出乳及乳制品中的总固体含量、脂肪含量(如添加了蔗糖等非乳成分含量,也应扣除),再用总固体减去脂肪和蔗糖等非乳成分含量,即非脂乳固体。

    3.2 乳新鲜度测定的原理

    美兰还原试验是用来判断原料乳新鲜程度的一种色素还原试验。新鲜乳加入亚甲基兰后染为蓝色。如污染大量微生物产生还原酶使颜色逐渐变浅,直至无色,通过测定颜色变化时间,间接推断出鲜奶的卫生质量。

    3.3 原料乳抗生素残留测定的原理

    培养基预先混合嗜热脂肪芽孢杆菌芽胞,并含有pH指示剂(溴甲酚紫)。加入样品并孵育后,若该样品中不含有抗生素或抗生素的浓度低于检测限,细菌芽胞将在培养基中生长并利用糖产酸,pH指示剂的紫色变为黄色。相反,若样品中含有高于检测限的抗生素,则细菌芽胞不会生长,pH指示剂的颜色保持不变,仍为紫色。

    3.4 原料乳菌落总数测定的原理

    菌落总数:菌落总数就是指在一定条件下(如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等)每克(每毫升)检样所生长出来的细菌菌落总数。按国家标准方法规定,即在需氧情况下,37℃培养48h,能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数,所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌,由于现有条件不能满足其生理需求,故难以繁殖生长。 四、实验主要仪器与设备

    4.1 原料乳抗生素残留测定原料及设备 4.1.1 原料及试剂 灭菌脱脂乳;PCA培养基

    4.1.2 设备

    除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下

    恒温培养箱;恒温水浴锅;100μL、200μL微量移液器及吸头;无菌试管:18×180

    4.2 原料乳新鲜度测定

    除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下

    恒温培养箱;恒温水浴锅;100μL、200μL微量移液器及吸头;无菌试管:18×180

    4.3 乳总固形物测定原料及设备 4.3.1原料及试剂

    除非另有规定,本方法所用试剂均为分析纯,水为三级水。

    1)平底皿盒:高 20 mm~25 mm,直径 50 mm~70 mm 的带盖不锈钢或铝皿盒,或玻璃称量皿。

    2)短玻璃棒:适合于皿盒的直径,可斜放在皿盒内,不影响盖盖。 3)石英砂或海砂:可通过500μm孔径的筛子,不能通过180μm孔径的筛子,并通过下列适用性测试:将约20g的海砂同短玻棒一起放于一皿盒中,然后敞盖在100 ℃±2 ℃的干燥箱中至少烘2h。把皿盒盖盖后放入干燥器中冷却至室温后称量,准确至0.1 mg。用5mL水将海砂润湿,用短玻棒混合海砂和水,将其再次放入干燥箱中干燥4 h。把皿盒盖盖后放入干燥器中冷却至室温后称量,精确至0.1mg,两次称量的差不应超过0.5mg。如果两次称量的质量差超过了0.5mg,则需对海砂进行下面的处理后,才能使用:

    将海砂在体积分数为25 %的盐酸溶液中浸泡3d,经常搅拌。尽可能地倾出上清液,用水洗涤海砂,直到中性。在160 ℃条件下加热海砂4 h。然后重复进行适用性测试。

    4.3.2 仪器与设备

    天平:感量为0.1 mg;干燥箱;水浴锅 4.4 菌落总数检测设备与材料 4.4.1 试剂和原料 PCA培养基:120ml/瓶; 4.4.2 仪器和设备

    除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:

    冰箱:2 ℃~5 ℃;恒温培养箱:28 ℃±1 ℃;均质器;恒温振荡器;显微镜: 10×~100×;电子天平:感量0.1 g;无菌锥形瓶:容量500 mL、250 mL;无菌广口瓶:500 mL;无菌吸管:1 mL(具0.01 mL 刻度)、10 mL(具 0.1 mL 刻度);

    无菌平皿:直径90 mm;无菌试管:10 mm×75 mm;无菌牛皮纸袋、塑料袋。 五、实验步骤

    5.1 原料乳抗生素残留测定

    样品9ml置于灭菌空试管中(平行两份),阴性对照管和阳性对照管各1份(老师提供)。

    所有试管80℃±2℃水浴加热5min,冷却至37℃,加入测试菌液1ml,轻轻旋转试管混匀。37℃水浴2h,加入4%TTC水浴液0.3ml,混匀后37℃,水浴避光培养30min,观察颜色变化。

    5.2 原料乳新鲜度测定

    吸取10ml牛奶于灭菌空试管中(平行2份),在水浴中加热到38℃,再加入亚甲基兰溶液1ml混匀。

    将试管放入水浴中,每30min观察1次褪色情况,并记录每个样品褪色时间。 5.3 乳总固形物测定

    在平底皿盒中加入20g石英砂或海砂,在100 ℃±2 ℃的干燥箱中干燥2 h,于干燥器冷却0.5 h,称量,并反复干燥至恒重。称取5.0 g(精确至 0.0001 g)试样于恒重的皿内,置水浴上蒸干,擦去皿外的水渍,于100 ℃±2 ℃ 干燥箱中干燥3 h,取出放入干燥器中冷却0.5 h,称量,再于100 ℃±2 ℃ 干燥箱中干燥 1 h,取出冷却后称量,至前后两次质量相差不超过 1.0 mg。试样中总固体的含量按式计算:

    m1-m2

    X??100

    m

    式中:

    X——试样中总固体的含量,单位为克每百克(g/100g); m1——皿盒、海砂加试样干燥后质量,单位为克(g); m2——皿盒、海砂的质量,单位为克(g); m——试样的质量,单位为克(g)。

    5.4 菌落总数检测 5.4.1 样品的稀释

    5.4.1.1 固体和半固体样品:称取25 g样品至盛有225 mL 灭菌蒸馏水的锥形瓶中,充分振摇,即为1:10稀释液。或放入盛有225 mL无菌蒸馏水的均质袋中,用拍击式均质器拍打2min,制成1:10的样品匀液。

    5.4.1.2 液体样品:以无菌吸管吸取 25 mL 样品至盛有 225 mL 无菌蒸馏水的锥形瓶(可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成 1:10 的样品匀液。

    5.4.1.3 取1 mL 1:10 稀释液注入含有9 mL 无菌水的试管中,另换一支1 mL无菌吸管反复吹吸,此液为1:100 稀释液。

    5.4.1.4 制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用1次1 mL无菌吸管。

    5.4.1.5 根据对样品污染状况的估计,选择 2 个~3 个适宜稀释度的样品匀液,在进行10倍递增稀释的同时,每个稀释度分别吸取1 mL样品匀液于2个无菌平皿内。同时分别取1 mL样品稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。

    5.4.1.6 及时将15 mL~20 mL冷却至60 ℃的PCA培养基倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。

    5.4.2 培养

    待琼脂凝固后,将平板倒置,28℃±1℃培养5d,观察并记录。 5.4.3 菌落计数

    肉眼观察,必要时可用放大镜,记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母数。以菌落形成单位(colony forming units,CFU)表示。

    选取菌落数在 10 CFU~150 CFU 的平板,根据菌落形态分别计数霉菌和酵母数。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可计。菌落数应采用两个平板的平均数。 六、实验结果

    6.2 原料乳新鲜度测定

    11:15 进行新鲜度测定;12:15 试样呈浅蓝色;12:40 试样褪色;褪色时间1小时25分。

    由上述数据得出

    样品1 :m2=65.2807(g),m1=64.6609(g);

    m-m65.2807-64.6609X?21?100??100?12.18(g/100g)

    m5.0872样品2 :m2=66.4258(g),m1=65.8612(g);

    X?

    m2-m166.4258-65.8612

    ?100??100?11.18(g/100g) m5.0499

    得出平均值为?X=11.68(g/100g)

    七、结果分析与讨论

    实验结果达到预期。这个实验要注意的地方是做培养基的时候,动作要快,不然就让其他细菌污染培养基。通过这次实验了解生乳的国家标准及相关质量指标要求,还有掌握相关质量指标的检测方法及原理。

    篇二:脂肪乳实验

    第2章脂肪乳制备技术

    一、教学要求

    1.掌握生物分离科学的进展、相关项单元操作技术的基本原理。

    2.掌握实验方案设计的基本原则,学会实验方案设计的基本方法。

    3.熟练地实施设计方案,优化实验条件。

    4.掌握所学技术、方法在药学研究中的应用。

    5. 掌握实验数据的统计与处理,学会实验图表的制作方法以及实验结果分析讨论 二、教学学时

    计划课内64学时,其中讲授8学时、实验研究56学时。计划课外16学时,其中文献综述10学时、以小组为单位答疑2学时,集中论文交流4学时)

    三、讲授的内容

    1.载药脂肪乳的组成以及在药物制剂中的研究进展。

    2.脂肪乳制备的基本流程和原则。

    3.各实验的基本原理,操作步骤和注意事项。

    4.标准曲线的制作方法和要求,

    5.在本模块基础上开展蛋白质研究的思路和常用技术、方法。

    6. 实验设计和实施的基本的基本要求、注意事项。

    四、研究课题

    1.氯维地平脂肪乳制剂的处方研究

    2.氯维地平脂肪乳制剂的工艺优化

    3.氯维地平脂肪乳制剂的表征及质量评价

    4.氯维地平脂肪乳制剂的稳定性研究

    五、主要单元操作技术与设备

    1、单元操作技术:剪切乳化、高压均质、微射流

    2、主要设备:高剪切分散乳化机、高压微射流纳米分散仪、高压纳米均质机、Zetasizer/Nano-ZS90激光粒度仪、全自动不锈钢立式电热蒸汽消毒器、磁力搅拌器、烘箱、真空干燥箱、分析天平、电子台秤、制冰机、、紫外-可见光分光光度计、荧光分光光度计、高效液相色谱等。

    六、教学组织方式

    两人一组,所有实验由学生设计方案,独立完成。

    七、教学的重点和难点

    1、学习的自主性加大,审核学生的实验方案、提供必要的条件。

    2、讲授部分的难点是进展、制备思路、原则和常用技术、方法的学习。

    3、本模块涉及的仪器特别多,技术方法多,学习难度较大,力求与理论课的对接、举一反三。

    八、难点的解决办法:

    1、认真备课,该讲的讲深、讲透,重点一对一答疑。

    2、做好设计报告的审核,提前一个月做好仪器检修和药品的准备。

    3、做好必要的单元操作示教和研究过程的现场指导。

    九、相关参考书 1、孙彦,生物分离工程;

    2、严希康,生化分离技术;

    3、谭天伟,生物分离技术

    4、李建武,生物化学原理和方法;

    5、生物分离工程实验指导

    2—1氯维地平脂肪乳的处方研究

    材料与方法

    1 实验材料

    T-18basic高剪切分散乳化机(IKA);

    M100 PCE高压微射流纳米分散仪(Microfluidics,USA);

    高压纳米均质机(广州聚能生物科技有限公司)

    YM50全自动不锈钢立式电热蒸汽消毒器(上海三申);

    DF-101S磁力搅拌器(郑州长城科工贸有限公司);

    Zetasizer/Nano-ZS90激光粒度仪(Malvern,英国);

    蛋黄卵磷脂(Lipoid E80,供注射用)

    甘油(江西益普生药业有限公司,供注射用)

    EDTA-2Na(阿拉丁)

    油酸(Lipoid,供注射用)

    油酸钠(Lipoid,供注射用);

    2 实验方法

    通过单因素实验,以外观、粒径、粒径分布、zeta电位、游离脂肪酸等指标来评价,研究并探讨了油相、稳定剂以及抗氧剂对氯维地平脂肪乳的影响。

    2.1处方组分的选择

    以美国FDA批准上市的氯维地平静脉注射用脂肪乳处方为参考(见下表),在此基础上,选择对制剂影响较大的关键组分进行优化。

    美国 FDA 批准上市的氯维地平静脉注射用脂肪乳处方

    2.1.1油的种类和用量考察

    大豆油和 MCT 是脂肪乳常用的油相,以基础处方作为基本处方,改变油相,制备氯维地平脂肪乳,考察不同油相比例对乳剂的粒径等稳定性指标的影响。

    2.1.2稳定剂的种类和用量考察

    油酸、油酸钠是乳剂中常用的的稳定剂,以基础处方作为基本处方,改变稳定剂的种类和用量,制备氯维地平脂肪乳,分别考察不同稳定剂及其用量对乳剂的粒径等稳定性指标的影响。

    2.1.3抗氧剂的种类和用量考察

    由于脂肪乳中油和磷脂均易于空气中氧气反应,所以加入抗氧剂保护。选用注射液中常用的水溶性抗氧剂硫代硫酸钠、脂溶性抗氧剂 VE 以及两亲性抗氧剂硫辛酸进行对比,以基础处方作为基本处方,改变抗氧剂的种类和用量,制备氯维地平脂肪乳,然后在 60℃条件下放置 10 天,取样测定粒径、PDI、zeta 电位等各项指标,考察抗氧剂种类对氯维地平脂肪乳稳定性的影响,并进一步研究其最适合的用量。

    2.1.4EDTA-2Na 的用量

    在脂肪乳的制备过程中,尤其是剪切、匀质等过程,容易引入微量金属离子,金属离子会促进油脂氧化。金属离子螯合剂 EDTA-2Na 能与微量金属离子络合,具有提高油脂抗氧化及防止变色的作用。参考相关文献以及美国 FDA 批准上市的处方选择用量 0.005%

    2.2 质量的评价指标及方法

    2.2.1外观

    氯维地平脂肪乳制剂的外观应为乳白色,均匀,流动性良好。

    2.2.2粒径

    静脉注射用乳剂属于热力学不稳定体系,根据粒径可以判断是否符合静脉注射的要求,据粒度分布可以对制剂的均一稳定性进行预测。

    不同用途的乳剂对粒径大小要求不同。综合分析多种上市静脉注射用乳剂的质量标准,对于粒径和粒度分布的要求多为用库尔特计数器或激光粒度仪测定,大多数乳粒应在 0.5 μm 以下,在大于 0.5 μm 的乳粒总数中,大于 1 μm 的乳粒数不得超过 3%,并不得检出大于 5 μm 的乳粒。

    本实验过程将氯维地平脂肪乳用超纯水稀释一定的倍数,通过激光粒度仪进行粒径的测定。

    2.2.3zeta 电位

    zeta 电位是连续相与附着在分散粒子上的流体稳定层之间的电势差,它是对颗粒之间排斥力强度的度量,因此 zeta 电位是衡量体系稳定性的一个重要指标。目前测量 zeta 电位的方法主要有电泳法、电渗法、流动电位法以及超声波法,其中以电泳法应用最广。正负电荷符号都可以形成高 zeta 电位,即<-30 mV 和>+30 mV 都将视为高 zeta 电位。高 zeta 电位意味着较高的稳定性,稳定性较好的分散液具有抗凝聚性。

    2.2.4游离脂肪酸

    磷脂和植物油在制备、灭菌以及贮藏过程中均会水解,产生游离脂肪酸,导致脂肪乳 pH 值降低,pH 的降低显著降低磷脂的离子化程度,引起 zeta 电位的降低,从而导致脂肪乳不稳定,因此其含量反映了乳剂的稳定性。常用尼罗蓝法来测定游离脂肪酸含量,其浓度不得超过 5 mmol/L。

    具体方法:(1)尼罗蓝显色剂的配制:称取尼罗蓝 0.01 g 溶解于 50 ml 水中,加正庚烷 25 ml 振摇,弃去上层正庚烷,反复操作

    约 4 次,直到正庚烷层无色。取下层水溶液 10 ml,加无水甲醇 90 ml,混匀。本液置棕色瓶中,室温下可存放一个月。

    (2)对照品溶液配制:取 0.12821 g 棕榈酸置于 25 ml 容量瓶中,加正庚烷溶解,并稀释至刻度线,即得 20 mmol/L 的溶液,再将该溶液稀释至不用的浓度。分别取 20mmol/L 溶液 5、2.5、1.25 ml 和 2.5 mmol/L 溶液 5、2.5、1.25 ml 至 10 ml 容量瓶中得到 10、5、2.5、1.25、0.625、0.3175 mmol/L 的一系列标准溶液。

    (3)精密量取不同浓度(x)的对照品溶液各 1 ml,分别置 20 ml 具塞试管中,加异丙醇-正庚烷-0.5mol/L 硫酸溶液(40:10:1)的混合溶液 5.0 ml 振摇 1 分钟,放置 10 分钟(硫酸作用:将乳剂中的脂肪酸钠水解为脂肪酸,以测定全部的游离脂肪酸含量)。加正庚烷 2 ml和水 4 ml,密塞,上下翻转 10 次,静置 15 分钟,使分层,分别精密量取上层液 3ml,加入 1 ml 尼罗蓝指示剂,用 0.01 mol/LNaOH 滴定液滴定,至溶液低端由蓝色变为淡紫色,读出所用氢氧化钠的体积(y),以 xy 作图,得游离脂肪酸的标准曲线。

    (4)量取样品 1 ml(平行共 2 份),置 20 ml 具塞试管中,加异丙醇-正庚烷-0.5mol/L 硫酸溶液(40:10:1)的混合溶液5.0ml振摇1分钟,放置10分钟。加正庚烷3 ml和水3 ml,密塞,上下翻转 10 次,静置 15 分钟,使分层,精密量取上层液 3 ml,加入 1 ml 尼罗蓝指示剂,用 0.01 mol/LNaOH 滴定液滴定,至溶液低端由蓝色变为淡紫色,读出所用氢氧化钠的体积,代入标准曲线,计算得游离脂肪酸浓度。

    注意:样品溶液若按照步骤 4 操作,上层液 3 ml 浑浊,可能会影响滴定时颜色的判断,这是由于样品杂质过多,这时可采取两步萃取,即量取分层后的上层液 1 ml再按照步骤 3 进行操作!若实

    篇三:脂肪的测定

    脂肪的测定概述 脂类主要包括脂肪(甘油三酸脂)和类脂化合物(脂肪酸、糖脂、甾醇)。脂肪是食物中具有最高能量的营养素,也是中三大营养素之一,食品中脂肪含量是衡量食品营养价值高低的指标之一。在食品加工生产过程中,原料、半成品、成品的脂类含量对产品的风味、组织结构、品质、外观、口感等都有直接的影响,故食品中脂类含量是食品质量管理中的一向重要指标。

    一、 脂类的分类、组成、性质

    1、 分类(classification)

    包括简单脂类(有两种组分组成的如脂肪酸和醇生成脂)、复合脂类(除以上两种组分外还含有其他组分的成分)、衍生脂(只含单一组分,由其他脂类水解得到,如脂肪酸(饱和的、不饱和的)、醇(丙三醇、长链醇、甾醇)、脂溶性物料(包括脂溶性维生素A、D、E和K))

    2、 组成(composition)

    脂肪是由一分子甘油和三分子高级脂肪酸脱水生成的。

    甘油+脂肪酸 脂肪+水

    油脂的结构与类型取决于脂肪酸,如果三个脂肪酸的R烃基相同,就称简单脂, 即醇与脂肪酸组成。如果脂肪酸的R烃基不同,则为复合脂。

    3、 性质(proporty)

    (1) 物理性质(physical property)

    脂类一般为无色,无臭、无味,呈中性,比重小于1,固体脂类比重约为0.8,液体脂类比重为0.915-0.940,脂肪不溶于水,而溶于有机溶剂,根据这点我们一般采用低沸点的有机溶剂萃取脂类。

    (2) 化学性质(chemical property)

    a) 水解与皂化(一切脂肪都能在酸、碱或酶的作用下水解为脂肪酸及甘油)

    b) 氢化与卤化(利用氢化将液体油氢化成半固体脂肪,人造猪油)。 c) 氧化与酸败

    天然油脂暴露在空气中与氧会自发进行氧化作用,产生酸味,也就是我们所说的酸败统称哈败。例如油炸方便面,在夏季容易发哈。还有一些富含油的食品,长时间都容易发哈, 哈败是由于脂肪中不饱和链被空气中的氧所氧化,生成过氧化物,过氧化物继续水解,产生低级的醛和羧酸,这些物质使脂肪产生不愉快的嗅感和味感。 油脂酸败的另一个原因是微生物的作用下,脂肪分解成醇和脂肪酸,脂肪酸经过氧化后生

    成苦味及臭味的低级酮类。对于脂肪与空气氧产生自动氧化,工厂用一些抗氧剂来防止油的自动氧化。

    另外,除了上面几点以外,油在高温加热时发生劣变,在用油脂进行油炸食品的工程过程中,也会因长时间的高温加热使油脂产生劣变,颜色加深,稠度增大,并且油易起泡。高温长期加热的结果是游离脂肪酸增多,另外不饱和脂肪还可聚合生成各种聚合物,其中的二聚物对人体的毒性较大,例如,长期食用这种油脂可使肝脏肿大。

    脂类的测定方法

    由于食品的种类不同,其中脂肪含量及其存在形式也不相同,测定脂肪的方法也就不同。

    常用的测定方法有:

    (1)索式提取法 (2)巴布科克法 (3)益勒式法 (4)罗斯-哥特里法(5)酸分解法

    过去测定脂肪普遍采用的是索式提取法,这种方法至今仍被认为是测定多种食品脂类含量的代表性的方法,但对于某些样品测定结果往往偏低,而巴布科克法、益勒式法、罗斯-哥特里法主要用于乳、及乳制品中脂类的测定,而酸水解法测出的脂肪为游离态脂和结合脂全部脂类。

    一、 索式提取法(经典方法)

    1、 原理

    样品经前处理后,放入圆筒滤纸内,将滤纸筒置于索式提取管中,利用乙醚或石油醚在水浴中加热回流,使样品中的脂肪进入溶剂中,回收溶剂后所得到的残留物,即为脂肪(粗脂肪)

    采用这种方法测出游离态脂,此外还含有磷脂、色素、蜡状物、挥发油、糖脂等物质,所以用索氏提取法测得的脂肪为粗脂肪。

    2、 适用范围与特点

    索氏提取法适用于脂类含量较高,结合态的脂类含量较少,能烘干磨细,不宜吸湿结块的样品的测定。

    此法只能测定游离态脂肪,而结合态脂肪无法测出,要想测出结合态脂肪需在一定条件下水解后变成为游离态的脂肪方能测出。

    另外此法是经典方法,对大多数样品结果比较可靠,但需要周期长,溶剂量大。

    3、 方法

    (1) 滤纸筒的制备

    将滤纸剪成长方形8×15cm ,卷成圆筒,直径为6cm,将圆筒底部封好,最好放一些脱脂棉,避免向外漏样。

    (2) 称取样品,将样品烘干磨细,称取一定量与纸筒封好上口,最好用测定水的样品。

    (3) 索式抽提器的准备

    索氏抽提器由三部分组成,回流冷凝管、提取管、提脂瓶组成。提脂瓶在使用前需烘干并称至恒重。其它要干燥。

    (4) 抽提

    将装好样的纸筒放入抽提管 , 倒入乙醚,乙醚的量从提取管加入,加入的量为提取瓶体积的2/3 接上冷凝装置,在恒温水浴中抽提,水浴温度大约为55℃左右,可用滤纸检验,理论值抽提6-8小时,实际值3-4小时,但也根据样品性质来决定。

    (5) 回收乙醚

    当乙醚在提取管内即将虹吸时立即取下提取管,将其下口放到乙醚回收瓶内,使之倾斜,然后将提取瓶放到100-150℃烘箱烘至恒重。

    (6) 计算

    脂肪%= (W2-W1)/W x 100

    W2——瓶和样品重(g)W1——瓶子重量(g) W——样品重量(g) 或:

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